判斷細胞培養基是否長菌(即被污染)主要可以通過肉眼觀察和顯微鏡檢查兩種方式。以下是具體的判斷方法:
肉眼觀察
?細菌污染?:通常在污染后4-6小時,培養基會變得渾濁。有時稍加震蕩,便會有很多混濁物漂起。細菌污染爆發非常快,上午染菌,下午或第二天就爆發,培養基會變渾濁,并且pH發生很大變化,培養基顏色會變化很大,一般是變黃?。
?真菌污染?:真菌污染一般爆發時間在2-3天。在爆發時,培養基里會有肉眼可見的污染物,培養基也開始變渾濁。如果時霉菌污染,爆發時,培養基里肉眼可見一坨一坨的白點;如果是念珠菌,會在顯微鏡下看到一串一串的珠子樣的?。
顯微鏡下觀察
?細菌污染?:在顯微鏡下呈黑色細沙狀,或背景有大量黑點。受細菌污染的細胞形態可能會發生改變(如多角、多核等),胞質中產生空泡、細胞漂浮凋亡?。
?真菌污染?:有些真菌呈類似棉花絮狀的漂浮物。若是念珠菌會呈卵圓狀,在細胞周邊生長。早期并不會使得培養基變黃變渾濁,但在顯微鏡下可觀察到菌絲體。真菌形成的菌絲呈絲狀,管狀,樹枝狀,串珠狀?。
其他判斷方法
?培養基不渾濁,有絲狀物質?:可以初步判斷是真菌污染?。
?培養基不渾濁、沒有絲狀物質,但是細胞狀態變差,生長變慢?:在顯微鏡下觀察可能會有小黑點,是細胞凋亡壞死,釋放出大量碎片,看起來就像黑膠蟲,細胞傳代以后就出現細胞間黑點,細胞空泡化,很多類似凋亡、壞死的細胞,最終細胞漂浮,死亡?。